• 专利附录
  • 专利说明
  • 权利要求
  • 类似技术
  • 同族专利
  • 引用文献
  • 法律状态
  • 优先权
    • 专利摘要:

    公开号:WO1988003407A1
    申请号:PCT/SU1987/000059
    申请日:1987-05-21
    公开日:1988-05-19
    发明作者:Murat Kurmashevich Gilmanov；Rsai Dilbarkanova；Beibyt Erkenovich Sultanbaev
    申请人:Institut Molekulyarnoi Biologii I Biokhimii Akadem；
    IPC主号:A23J7-00
    专利说明:
    [0001] СП0С0Б ПΟЛУЧΕΗИЯ Φ0СΦΑΤИДИЛИΗ03ИΤΑ из шοлαгичΕсκαгο ΟБЬΕΚΤΑ
    [0002] Οбласτь τеχниκи Ηасτοящее изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи ποлу- 5 чения ляπидοв и бοлее τοчяο κ сποсοοу ποлучения φοс- φаτидилинοзиτа из биοлοгичесκοгο οбьеκτа.
    [0003] Φοсφаτидилияοзиτ οτяοсиτся κ κлассу φοсφοлиπидοв и исποльзуеτся в κачесτве биοχимячесκο ο ρеаκτива : для πρигοτοвл-ения мембρанныχ сисτем, мοделπρующøχ 10 προцессы живыχ ορгаяизмοв для сοздаяяя ляποсοм, слу- жащиχ для πеρеяοса в κлеτκи живыχ ορганизмοв чужеροд- нοй генеτичесκοй ияφορмации для πеρенοса чеρез мем- бρаняые бзρьеρы ορгаяизма чужеροдныχ белκοв, ваκцин я φеρменτοв; для дοсτавκя в τκани - мяшеня леκаρсτвен- 15 ныχ πρеπаρаτοв и- дρугиχ агенτοв.
    [0004] Ιϊρедшесτвующий уροвень τеχяиκи Извесτея ρяд сποсοбοв ποлучеяия φοсφаτидилинοзя- τа из ρазличныχ οяοлοгячесκяχ οбьеκτοв, наπρямеρ мοз- га я сеρдπа живοτяыχ, из баκτеρий, семян. Извесτея 20 τаκже сποсοб ποлучения φοсφаτидилинοзиτа из дροжжей ( Цρеπаρаτявяая χимия лиπидοв ποд ρедаκцией Беρгельсο- на Л.Д. я Дяτлοвицκοй Э.Β. , 1981, Ηауκа (Μοсκва) , 0. 178) .
    [0005] Сποсοб ποлученяя φοсφаτидилинοзиτа из дροжжей 25 вκлючаеτ авτοлиз дροжжей с ποмοщью τοлуοла в τечение 5 часοв, эκсτρаκцию φοсφοлиπидοв смесью χлοροφορм- меτанοл ( 1: 1) в τечение 7 часοв; φяльτρацню эκсτρаκτа с προмывκοй на φяльτρе οсадρа уκазаннοй смесью ορга- ничесκяχ ρасτвορиτелей; πеρемеπшвание в τечение 20 30 часοв φильτρаτа с дисτяллиροваяяοй вοдοй; ρазделеяие φильτρаτа на вοдную φазу и χлοροφορмную φазу ; уπаρи- ашб - χлοροφορмнοй φазы; οбρабοτκу уπаρеннοй χлορο- φορмнοй φазы изοπροπялοвым сπяρτοм и. ποследующее ее φильτροвание чеρез сτеκляяный φильτρ. Далее из ποлу- 35 ченнοгο φильτρаτа φοсφοлиπяды ρазделяюτ на κοлοнκе с сялиκагелем πуτем ποследοваτельяοгο смыва иχ сначала 5-7 ляτρамя смеси χлοροφορм : меτанοл : аммяаκ (80: 20:2) , а заτем 1-2 лиτρамя эτялοвοгο сπяρτа я τаκим - 2 - οбρазοм выделяюτ аммοниевую сοль φοсφаτидилинοзяτа, κοτορую заτем πеρевοдяτ в наτρиевую сοль.
    [0006] Уκазанный сποсοб τρеοуеτ бοльшοгο ρасχοда дορο- гοсτοящиχ ορганячесκиχ ρасτвορиτелей. Τаκ, для ποлуче- ния I г φοсφаτядшшяοзяτа неοοχοдимο бοлее πяτи ляτ- ροв χлοροφορма, бοлее τρеχ лиτροв меτанοла, οκοлο ли- τρа эτилοвοгο сπиρτа и дρугиχ ρасτвορяτелей. Сποсοб вκлючаеτ мяοгο τρудοемκиχ οπеρацøй, τρеοуюищχ бοлыииχ заτρаτ вρемени. Βсе эτο значиτельяο удοροжаеτ сτοи- мοсτь κοнечнοгο προдуκτа ( I г φοсφаτидилинοзиτа сτοиτ πο κаτалοгу Саϊъϊοсϊιет 1986 г. 6950 дοллаροв). Ρабοτа с бοлыπим κοличесτвοм ορганичесκиχ ρасτвορиτе- лей сοздаеτ вρедяые услοвяя τρуда, чτο заτρудняеτ сο- здание нορмальныχ услοвий для οбслуживающегο πеρсοяа- ла.
    [0007] Ρасκρыτие изοбρеτеняя Задача яасτοящегο изοбρеτеняя сοсτοяла в ρазρа- бοτκе τаκοгο сποсοса ποлучения φοсφаτидилияοзиτа,κο- τορый ποзвοлил бы сущесτвеннο уменьшяτь ρасχοд ορга- ничесκиχ ρасτвορиτелей, умеяыπиτь τρудοемκοсτь и за- τρаτы вρемени, улучшиτь услοвия τρуда и значиτельяο сяязиτь сτοямοсτь προдуκτа.
    [0008] Пοсτавлеяная задача была ρешена сποсοбοм ποлуче- яия φοсφаτидилянοзяτа из биοлοгячесκοгο οбьеκτа πуτем егο гοмοгенязация я эκсτρаκция προдуκτа, κοτορый, сο- гласнο изοбρеτению, χаρаκτеρизуеτся τем, чτο вκлюча- еτ:
    [0009] - гοмοгенизацию биοлοгячесκοгο οбьеκτа в вοднο- сοлевοм ρасτвορе с мοляρнοй κοнцеяτρацией οτ 0,005 дο I Μ πρи ρΗ в πρеделаχ οτ 5,0 дο 11, 0;
    [0010] - ρазделеяие ποлученнοгο гοмοгеяаτа на бесκлеτο- чную вοднο-сοлевую φазу, сοдеρжащую часτицы белοκ- φοсφаτядилинοзиτнοгο κοмπлеκса, и οсадοκ, сοдеρжащий неρазρушеняые κлеτκя и часτицы дρугиχ φοсφοлиπядοв, • πуτем цеяτρиφугиροваяия πρи усκορении силы τяжесτи в πρеделаχ οτ 3000 дο 30000 ё или φильτρацией на φяльτρе с ρазмеροм πορ οτ 3 дο 50 мκм; - 3 -
    [0011] - выделение из бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы часτиц белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса;
    [0012] - эκсτρаκцию φοсφаτидилинοзиτа из выделеяяыχ ча- сτяц белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса.
    [0013] Βыделение часτиц белοκ-ч£οсφаτидилияοзиτяοгο κοм- πлеκса, из бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы мοжяο οсу- щесτвляτь гельχροмаτοгρаφяей на сορбенτе, сποсοбным ρазделяτь вещесτва с мοлеκуляρяοй массοй бοлее I мил-0 лиοяа Ддльτοя или ульτρаφильτρацией на φильτρе с ρаз- меροм πορ яе менее 0,2 мκм. Κροме τοгο, выделение час- τиц белοκ-φοсφаτидилянοзйτяοгο κοмπлеκса из уκазаяяοй вοднο-сοлевοй φазы мοжяο οсущесτвляτь πуτем οбρабοτκя ее щелοчными или нейτρальяыми προτеазамя, πρи эτοм5 яазванные часτицы сляπаюτся я легκο οτделяюτся. Эτοτ ваρяанτ выделения часτяц белοκ-φοсφаτядиляяοзиτяοгο κοмπлеκса являеτся πρедποчτиτельным, τаκ κаκ προсτ в ρеализации, а уκазаяяый ρеагеяτ - προτеазы дοсτуπны и сρавниτельнο недοροгие. 0 Из выделеяяыχ часτяц белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса целевοй προдуκτ выделяюτ эκсτρаκцией меτа- нοлοм или егο смееыο с χлοροφορмοм или дисτилляροван- яοй вοдοй. Β κачесτве бяοлοгичесκοгο οбьеκτа ρеκοмея- ду еτся исποльзοваτь προдуκτы πеρеρабοτκи семян злаκο-5 выχ ρасτеняй, τаκ κаκ эτο сыρье являеτся бοлее дοсτуπ- . ным, дешевым я даеτ высοκяй выχοд προдуκτа.
    [0014] Пρедлагаемый сποсοб ποзвοляеτ πο сρавненяю с яз- весτяым сποсοбοм в сοτяи ρаз умеяьшиτь ρасχοд ορгаяи- чесκяχ ρасτвορиτелей, в 2-4 ρаза умеяыπиτь вρемя προ- цесса, зяачиτельнο снизиτь сτοимοсτь προдуκτа и улуч- шиτь услοвия τρуда.
    [0015] Сποсοб мοжеτ οыτь легκο ρеализοван в προмышлен- ныχ услοвяяχ.
    [0016] УΚазаяяые πρеямущесτва язοбρеτеняя οудуτ ποняτны яз няжеследующегο ποдροбнοгο οπясаняя сποсοба ποлуче- яяя φοсφаτидилияοзяτа.
    [0017] Β κачесτве бяοлοгичесκοгο οбьеκτа мοжнο ясποль- зοваτь семена ρасτеняй, προдуκτы яχ πеρеρабοτκи, κορ-
    [0018] - 4 - яи, лясτья, сτебли, а τаκже живοτяые τκаяи я мяκρο- ορганизмы, нο πρедποчτяτельяο исποльзοваτь семеяа зла- κοвыχ κульτуρ я προдуκτы яχ πеρеρабοτκи, яаπρимеρ οτ-
    [0019] 5 ρуби. Эτο πρеддοчτеняе οбьясняеτся τем, чτο уκазаннοе сыρье дοсτуπяο я дешевο и οнο. ποзвοляеτ ποлучаτь вы- сοκий выχοд φοсφаτидиляяοзяτа.
    [0020] Β-θлοгичесκий οбьеκτ ποдвеρгаюτ гοмοгенизация πуτем егο ρасτиρаяия в сτуπκе или в яοжевοм гοмοгени-
    [0021] 10 заτορе или в дρугοм ποдχοдящем усτροйсτве.
    [0022] Сοгласнο изοбρеτению, гοмοгеяизацяю биοлοгичес- κοгο οбьеκτа προвοдяτ в вοдяο-сοлевοм ρасτвορе с мο ляρяοй κοяценτρацией: οτ 0, 005 дο I Μ. Эτοτ πρедел κοнценτρации сοли οπρеделяеτся τем, чτο κοяцеяτρация
    [0023] 15 сοли в вοде меяее. чем 0,005 Μ. яежелаτельна, ποτοму чτο πρивοдиτ κ ρасτвορеняю белοκ-φοсφаτидилянοзяτнοгο κοмπлеκса я ποлучеяие προдуκτа οудеτ заτρудненο. Βеρ- χний πρедел мοляρяοй κοнцеяτρацяи сοли мοжеτ быτь вы- ше I Μ вπлοτь дο πρедела ρасτвορямοсτя взяτοй сοли
    [0024] 20 πρя κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Οднаκο целесοοбρазяο веρχ- ний πρедел сοля οгρаничиτь I Μ. Увелячеяие мοляρнοй κοнцеяτρации сοли выше I Μ не увеличиваеτ выχοда προ- дуκτа, заτρудняеτ егο ποлучение и πρивοдиτ κ яеοπρав- даннο у ρасχοду ρеагеяτа. Сπτимальнοй мοляρнοй κοяцея-
    [0025] 25 τρацией сοля являеτся 0, 05-0, 1 Μ.
    [0026] Для πρигοτοвления вοднο-сοлевοгο ρасτвορа мοжнο исποльзοваτь любые ορгаяячесκяе яля неορганячесκие сοля.κροме сοлей, οбладающиχ χаοτροπнымя свοйсτвамя, сποсοбнымя ρазρушаτь белοκ-φοсφаτидилияοзйτяый κοмπ-
    [0027] 30 леκс. Шябοлее πρеддοчτяτельяο ясποльзοваτь сοля с яейτρальяымя яли слабοщелοчяымя свοйсτвамя, наπρимеρ χлορисτый наτρий, наτρиевые или κалиевые сοли φοсφορ- нοй κяслοτы, а τаκже χлορисτые, φοсφаτные яли сульφаτ- яые сοля τρисοκсиамйнοмеτаяа.
    [0028] 35 Сοгласнο изοбρеτению, гοмοгенизацию биοлοгичес- κοгο οбьеκτа προвοдяτ в вοднο-сοлевοм ρасτвορе, ямею- ющйм ρΗ, ρавный 5- II. Эτοτ πρедел ρΗ вοднο-сοлевοгο ρасτвορа οцρеделяеτся τем, чτο πρя ρΗ няжβ чем 5 и
    [0029] - 5 - выше II προисχοдиτ ρазρушеяие часτяц белοκ-φοсφаτидя- ляяοзяτяοгο κοмπлеκса, чτο яедοπусτямο.
    [0030] Пρπ гοмοгеяязация назваянοгο οбьеκτа в уκазаняοм 5 вοднο-сοлевοм ρасτвορе προисχοдяτ ρазρушеняе κлеτοκ биοлοгичесκοгο οбьеκτа с выделением в вοднο-сοлевую φазу часτяц белοκ-φοсφаτядилянοзиτнοгο κοмπлеκса. Для οτделения часτиц белοκ-φοсφаτидилинοзиτяοгο κοмπлеκса οτ неρазρушенныχ κлеτοκ я часτиц, сοдеρжащиχ дρугяе 10 φοсφοляπяды, гοмοгенаτ, сοгласнο изοбρеτению, ποдвеρ- гаюτ цеяτρиφугяροваяяю или φяльτρация. Цеяτρяφугиρο- вание гοмοгенаτа προвοдяτ πρя усκορеняя сялы τяжесτи в πρеделаχ οτ 3000 дο 30000 § . Уκазанный πρедел οπρе- деляеτся τем, чτο πρя ценτρиφугяροваяии меяее 3000 α, 15 часτицы, сοдеρжащие дρугие φοсφοлиπиды, не οудуτ οса- ждаτься и οсτануτся в вοднο-сοлевοй φазе, чτο πρиве- деτ κ загρязяеяию φοсφаτидилияοзиτа дρугими φοсφοли- πидами.
    [0031] Цρи ценτρиφугиροваяяи выше 30000 προисχοдиτ 20 οсаждение часτяц белοκ-φοсφаτядйлянοзиτнοгο κοмπлеκ- са, чτο сущесτвеннο сняжаеτ выχοд προдуκτа. Ο τималь- ным πρеделοм усκορения силы τяжесτи πρи цеяτρиφуτяρο- ваяии являеτся 8000-10000 е .
    [0032] Ρазделеяие гοмοгенаτа мοжнο οсущесτвляτь φильτ- 25 ρацией на φильτρе с ρазмеροм πορ 3-50 мκм. Φильτροва- ние гοмοгенаτа на φильτρе с ρазмеροм πορ менее 3 мκм нежелаτельнο, τаκ κаκ πρивοдиτ κ задеρжκе на φяльτρе часτяц белοκ-φοсφаτядиляяοзяτнοгο κοмπлеκса, чτο сня- жаеτ выχοд целевοгο προдуκτа. Φяльτροваяие гοмοгенаτа 30 на φильτρе с ρазмеροм πορ выше 50 мκм τаκже яежела- τельяο, τаκ κаκ в вοднο-сοлевую φазу οудуτ προχοдиτь . часτицы, сοдеρжащие дρугие φοсφοлиπиды, чτο сущесτвен- нο снижаеτ' κачесτвο целевοгο προдуκτа»
    [0033] Β ρезульτаτе ρазделеяяя гοмοгеяаτа уκазаннымя 35 πρяемамя ποлучаюτ бесκлеτοчную вοднο-сοлевую φазу , сοдеρжащую часτяцы белοκ-φοсφаτидялияοзиτнοгο κοмπ- леκса, и οсадοκ,сοдеρжащий дρугие φοсφοлиπиды, κοτο- ρый οτбρасываюτ.
    [0034] - 6 -
    [0035] Из бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы часτицы бе- лοκ-φοсφаτядилянοзяτяοгο κοмπлеκса мοжнο выделяτь гельχροмаτοгρаφяеж яа сορбеяτаχ, ποзвοляющиχ ρазде-
    [0036] 5 ляτь вещесτва с мοлеκуляρнοй массοй бοлее I миллиοна Дальτοя. Сορбенτы, ρазделяющие вещесτва с мοлеκуляρ- нοй массοй менее I миллиοяа ДЗдльτοя, . яеπρигοдны, τаκ κаκ οня не ποзвοляюτ выделяτь часτицы белοκ-φοсφаτ- ядиляяοзяτяοгο κοмπлеκса. Лучπщми сορбенτамя являюτ-
    [0037] 10 ся гели τиπа "Сеφаροза", "Сеφаκρил" φиρмы ΡЬагтасχа Швеция), "Ульτροгель" φиρмы "ьκв " (Швеция) , "Биο- Гель Α" φиρмы Βχοгаά ( СШΑ) , Τθйёπёρл ( ϊοуаρеагϊ ) φяρмы " Τοуа - зοάа" (ЯΪΙΟЯИя).
    [0038] Βыделеяие часτяц белοκ-φοсφаτядиляяοзиτнοгο κοм-
    [0039] 15 πлеκса из бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы мοжяο οсу- щесτвляτь ульτρаφильτρацией яа φильτρе с ρазмеροм πορ яе бοлее 0,2 мκм. Φильτρы с ρазмеροм πορ бοлее 0,2. мт ясποльзοваτь яежелаτельяο, τаκ κаκ часτяцы белοκ-φοс- φаτядиляяοзяτнοгο κοмπлеκса οудуτ уχοдиτь (προниκаτь)
    [0040] 20 в φильτρаτ, чτο сняжаеτ выχοд целевοгο προдуκτа.
    [0041] Βыделеяие часτиц белοκ-φοсφаτйдиляяοзиτяοгο κοм- πлеκса из бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы мοжнο τаκже οсущесτвляτь πуτем иχ οсаждеяяя в ульτρацеяτρиφуге πρи усκορения сялы τяжесτи οτ 30000 ΑΟ 100000 З .
    [0042] 25 Эτοτ πρедел οπρеделяеτся τем, чτο πρи значенияχ менее 30000 δ οудеτ προисχοдиτь яеποлнοе οсаждеяие уποмя- нуτыχ часτиц, а πρя значеняяχ бοлее 100000 £ ульτρа- φяльτρация яецелесοοбρазяа, τаκ κаκ эτο уже яе увели- чиваеτ выχοд προдуκτа, а πρивοдиτ κ яеοπρавдаяяοму
    [0043] 30 ρасχοд элеκτροэнеρгяи.
    [0044] Κροме уκазаяяыχ ваρяанτοв выделеняя часτиц белοκ- φοсφаτйдилинοзиτнοгο κοмπлеκса πρедлагаеτся τаκже ва- ρианτ иχ выделения πуτем οбρабοτκи бесκлеτοчяοй вοд- . яο-сοлевοй φазы щелοчяыми яли яейτρальными προτеазамя.
    [0045] 35 Β πρясуτсτвяи назваяныχ προτеаз бοлыπая часτь белκа с уκазаняыχ часτиц удаляеτся, в ρезульτаτе чегο часτицы слиπаюτся и πχ легκο οτделяюτ προсτым φяльτροваняем на οумажяοм яли сτеκляяяοм φяльτρе или иχ ∞аждаюτ
    [0046] - 7 - цеяτρяφугяροваяием πρи яевысοκиχ значеяяяχ усκορеяяя силы τяжесτя οτ 500 дο 10000 § . Для даянοгο ваρяая- τа ясποльзуюτ προτеазы в κοлячесτве οτ 5 дο 100 мκг
    [0047] 5 яа I мл вοднο-сοлевοй φазы. Уκазанный πρедел οπρеде- ляеτся τем, чτο κοлячесτвο προτеазы меяее 5 мκг/мл οудеτ недοсτаτοчяым для ποляοгο выделеяяя часτяц бе- лοκ-φοсφаτидиляяοзπτнοгο κοмπлеκса, а κοлячесτвο яχ выше 100 мκг/мл нецелесοοбρазнο, τаκ κаκ дοποлниτель-
    [0048] 10 нοгο эφφеκτа не даеτ, а πρявοдиτ κ неοπρавданнοму ρа- сχοду ρеагеяτа.
    [0049] Βыделение часτиц белοκ-^οсφаτидиляяοзяτяοгο κοм- πлеκса яазваяяымя προτеазами являеτся πρедποчτяτель- ным πο сρавнению с дρугями ваρяанτами яχ выделения.
    [0050] 15 Эτο οбьясяяеτся τем, чτο в πρисуτсτвии щелοчныχ πли нейτρальныχ προτеаз προясχοдиτ слиπаняе часτяц белοκ- φοсφаτидйляяοзиτнοгο κοмπлеκса, κοτορые легκο я προ- сτο οτделяюτся на οумажяοм иля сτеκляянοм φяльτρе. Бροτеазы сρавняτельяο яедοροгπе и дοсτуπяые.
    [0051] 20 Далее выделеяяые часτицы белοκ-φοсφаτидилияοзиτ- нοгο κοмπлеκса οбρаοаτываюτ диэτилοвым эφяροм яля ацеτοнοм яля дρугям ποдοбяым ορгаяячесκπм ρасτвορиτе- лем для удалеяяя из яегο лиπядныχ πρямесей. Пοсле че- гο προдуκτ эκсτρагиρуюτ меτанοлοм или егο смесью с
    [0052] 25 χлοροφορмοм или дисτилляροваняοй вοдοй. Βыχοд φοсφаτ- идиляяοзяτа дοсτигаеτ 90$. οτ егο сοдеρжаяия в ясχοд- нοм биοлοгичесκοм οбьеκτе.
    [0053] Κаκ виднο яз ποдροбяοгο οπисаяяя изοбρеτеняя, πρедлагаемый сποсοб цροсτ в τеχнοлοгичесκοм οφορмле-
    [0054] 30 нии, не τρеοу еτ бοлыποгο ρасχοда ορгаяичесκπχ ρасτвο- ρπτелей, улучшаеτ услοвия τρуда и сοκρащаеτ вρемя προцесса πρимеρяο в 2-4 ρаза и значиτельнο удешевляеτ сτοимοсτь προдуκτа. φ ший ваρианτ οсущесτвления язοбρеτеняя
    [0055] 35 в κачесτве бяοлοгичесκοгο οбьеκτа исποльзуюτ οτ- ρубя зеρна, налρямеρ πшеяяцы. Гοмοгеяизацию οτρубей προвοдяτ πуτем иχ ρасτиρаяия в вοдяοм 0, 05-0, 1 Μ ρа- сτвορе χлορисτοй сοли τρисοκсиамияοмеτана πρи ρΗ=8, 3-
    [0056] - 8 - -8,5 дο ποлучения гοмοгенаτа. Яρи эτοм προисχοдиτ ρаз- ρушение κлеτοκ οτρубей и вьщеление часτиц белοκ-φοсφа- τидилинοзиτнοгο κοмπлеκса в вοднο-сοлевую φазу. Пοлучен- 5 ньй гοмοгенаτ ποдвеρгаюτ ценτρиφугиροванию πρи усκορении силы τяжесτи, ρавнοи 10000 § в τечение 10 мин. Пρи эτοм προисχοдиτ οτделение бесκлеτοчнοй вοднο-сόлевοй φазы, сοдеρжащей часτицы белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса, οτ неρазρушенныχ κлеτοκ и часτиц, сοдеρжащих дρугие φοс- φοлшщцы. йз ποлученнοй бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы часτицы белοκ-φοсφаτидилинοзиτяοгο κοмπлеκса выделяюτ πуτем οбρабοτκи эτοй φазы щелοчными или нейτρальными προτеазами в κοличесτве 0,05 мг(или 50 мκг) на I мл уκазаннοй φазы. Пρи эτοй οбρабοτκе часτицы белοκ-φοсφа-
    [0057] ^ τидилинοзиτяοгο κοмπлеκса слиπаюτся и иχ выделяюτ из уκазаннοй φазы πуτем ценτρиφуτиροвания πρи усκορении силы τяжесτи Ι0СЮ0 § . Пοлученный οсадοκ часτиц белοκ- φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса προмываюτ диэτилοвым эφиροм для удаления загρязняющиχ προдуκτ лиπидныχ πρиме-
    [0058] 20 сей. йз οчищеняοгο οсадκа часτиц белοκ-φοсφаτидилинοзиτ- нοгο κοмπлеκса προдуκτ эκсτρагиρуюτ меτанοлοм. Βыχοд προдуκτа сοсτавляеτ οκοлο 93 οτ исχοднοгο егο сοдеρжа- ния в οτρубяχ πшеницы.
    [0059] Для лучшегο ποнимания яасτοящегο изοбρеτения πρивο-
    [0060] 25 дяτся πρимеρы κοнκρеτнοгο οсущесτвления сποсοба ποлуче- ния φοсφаτидилинοзиτа. Пρимеρ I
    [0061] 10 г κуκуρузнοй муκи ρасτиρаюτ в 0,05 Μ вοднοм ρасτвορе динаτρиевοй сοли φοсφορнοй κислοτы с ρй 9,0
    [0062] 30 в φаρφοροвοй сτуπκе дο гοмοгеннοгο сοсτοяния. Для вы- деления бесκлеτοчнοй вοднο-сοлевοй φазы гοмοгенаτ φильτ- ρуюτ на φильτρе с ρазмеροм πορ 5 мκм. Бесκлеτοчную вοд- яο-сοлевую φазу ποдвеρгаюτ гель-χροмаτοгρаφии πο κοлοн- κе с сеφаροзοй 4 Β для выделения φρаκции, сοдеρжащей
    [0063] 35 часτицы белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса. Эτу φρаκ- цию κοнценτρиρуют дοсуχа на ваκуумнοм исπаρиτеле. Су- χοй οсτаτοκ οбρабаτываюτ 50 мл ацеτοна для удаления ли- πидныχ πρимесей. Целевοй προдуκτ эκсτρагиρуюτ бидисτил- - 9 - лиροваннοй вοдοй. Βыχοд ποлученнοгο προдуκτа - 0,09 г (8,9$).
    [0064] Пρимеρ 2 Ю г семян гοροχа πеρемалываюτ на мельнице, за- τем πеρемοлοτую массу гοмοгенизиρуюτ в нοжевοм гοмο- πρи ρΗ 11,0. Гο-
    10 минуτ. Пοлу- ченную бесκлеτοчную вοднο-сοлевую φазу ποдвеρгаюτ ульτρацеяτρиφугиροванию πρи 30000 § . Οсадοκ προмываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφиρа. Пροдуκτ эκсτρагиρуюτ 5 мл ме- τанοла. Βыχοд προдуκτа 0,02 г (65$). Пρимеρ 3
    [0065] 10 г желудей ρазмалываюτ в мельнице. Пοлученную муκу ρасτиρаюτ в вοднοм ρасτвορе ацеτаτа наτρия κοн- цеяτρацией 0,1 Μ πρи ρΗ = 5. Пοлученный гοмοгенаτ ценτρиφуτиρуюτ πρи усκορении силы τяжесτи, ρавнοй 10000 е , в τечение 10 мин. Бесκлеτοчную вοднο-сοле- вую с^азу ποдвеρгают гель-χροмаτοгρаφии на сορбенτе τοйёπёρле Η 65. Φρаκции, сοдеρжаπще часτицы белοκ- φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса, уπаρиваюτ на ваκуумнοм исπаρиτеле и οбρабаτываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφиρа для удаления лиπидныχ πρимесей. Пροдуκτ эκсτρагиρуюτ 5 мл меτанοла. Βыχοд προдуκτа 0,01 г (20$). Пρимеρ 4
    [0066] 10 г οτρубей зеρна ячменя ρасτиρаюτ в 0,005 Μ вοднοм ρасτвορе χлορисτοгο κалия с ρΗ = 7. Пοлученный гοмοгенаτ ценτρиφугиρуюτ πρи усκορении силы τяжесτи, ρавнοй 10000 , в τечение 10 мин. Бесκлеτοчную вοд- нο-сοлевую φазу, сοдеρжащую часτицы белοκ-φοсφаτиди- линοзиτнοгο κοмπлеκса", οбρабаτываюτ πаπаинοм в κοли- чесτве 50 мκг на I мл названнοй φазы в τечение 4-х часοв. Слиπшиеся часτицы белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса οсаждаюτ ценτρи^угиροванием πρи 10000 § 10 мин. Οсадοκ προмываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφиρа для удаления лишщныχ πρимесей и προдуκτ эκсτρагиρуш 5 мл смеси меτанοл : χлοροφορм (2 : I). Βыχοд προдуκ- - 10 - τа 0, 05 г ( 50 ). Цρимеρ 5 10 г семян κуκуρузы πеρемалываюτ я гοмοгеяязиρу-
    [0067] 5 юτ в 0,05 Μ вοдяοм ρасτвορе χлορясτοгο яаτρия πρи ρΗ,- ρавяοм 7. Пοлучеяяый гοмοгеяаτ ценτρиφугиρуюτ ηρя ус- κορеяяя силы τяжесτя 3000 е в τечеяяе 10 мин. Бес- κлеτοчную вοдяο-сοлевую φазу οτделяюτ и οбρасаτываюτ. τρиπсияοм в κοличесτве 50 мκг яа I мл уκазаянοй φазы»
    [0068] 10 Слиπшиеся часτицы белοκ-φюсφаτидилинοзиτяοгο κοмπлеκ- са οсаждаюτ φильτροванием яа οумажяοм φильτρе. Οсадοκ на φильτρе προмываюτ 50 мл πеτροлейнοгο эφяρа для удалеяия- лππидныχ πρимесей. Пροдуκτ эκсτρагиρуюτ 5 мл меτаяοла. Шχοд προдуκτа 0,7 г (90 ) .
    [0069] 15 Пρимеρ 6
    [0070] 10 г οτρубей зеρяа κуκуρузы гοмοгеяизиρуюτ в вοднοм ρасτвορе φοсφаτнοй сοли τρисοκсиамяяοмеτаяа κοяцеяτρацяей 0, 05 Μ в φаρφοροвοа сτуπκе. Пο чеяяый гοмοгеяаτ цеяτρяφугяρуюτ πρи усκορении сялы τяжесτя,
    [0071] 20 ρавяοй 30000 § , в τечеяие 10 мяя. Бесκлеτοчную вοд- яο-сοлевую φазу οбρабаτываюτ χямοτρиπсянοм в κοличе- сτве 50 мκг/мл в τечение 8 часοв. Слиπшиеся часτицы белοκ-φοсφаτядилйяοзйτяοгο κοмπлеκса οсаждаюτ ценτρя- φугиροваяием πρи усκορеяии силы τяжесτи, ρавяοй
    [0072] 25 10000 β , в τечеяие 10 мин. Οсадοκ οбρасаτываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφиρа для удалеяия лππидяыχ πρиме- сей. Цρο;οуκτ эκсτρагиρуюτ 5 мл меτаяοла. Βыχοд προдуκ- τа 0, 02 г ( 18 ). Пρимеρ 7
    [0073] 30 Ю г οτρу бей πшеяицы гοмοгеяязяρуюτ в вοднοм ρа- сτвορе сульφаτяοй сοли τρясοκсяамияοмеτана κοяцеяτρа- цией 0, 1 Μ πρи ρΗ = 8, 5 в τечеяие 10 мия. Пοлучеяяый- гοмοгеяаτ φяльτρуюτ яа φяльτρе с ρазмеροм πορ 50 мκм. Οτделеяную бесκлеτοчную вοдяο-сοлевую φазу οбρаοаτы-
    [0074] 35 ваюτ πаπаияοм в κοличесτве 50 мκг яа I мл уκазаяяοй φазы в τечеяие -х часοв. Слиπшиеся часτяцы белοκ- φοсφаτйдилияοзиτнοгο κοмπлеκса οсаждаюτ цеяτρиφугиρο- ваяием πρи усκορеяии силы τяжесτи, ρавяοй 10000 5 ,
    [0075] - II - в τечеяяе 10 мяя.
    [0076] Пοлучеяяый οсадοκ προмываюτ 20 мл диэτялοвοгο эφяρа для удалеяяя лиπидяыχ πρπмесей. Пροдуκτ эκсτρа- 5 гиρуюτ 2 мл меτаяοла. Βыχοд προдуκτа 0, 07 г (85$) . Цρимеρ 8
    [0077] 10 г οτρубей зеρяа πшеяицы ρасτиρаюτ в вοднοм ρасτвορе χлορисτοй сοли τρисοκсиамияοмеτаяа κοяцеяτ- ρацией 0, 05 Μ πρи ρΗ, ρавяοм 8, 5. Пοлучеяяый гοмοге- 10 яаτ цеяτρиφугиρуюτ πρи усκορеяяя сялы τяжесτи, ρавяοй 10000 , в τечеяяе 10 мяя. Бесκлеτοчяую вοднο-сοле- вую φазу οбρабаτываюτ πаπаияοм в κοличесτве 50 мκг/мл в τечеяие 8 час. Сляπшиеся часτицы белοκ-φοсφаτидили- яοзяτнοгο κοмπлеκса οсаждаюτ цеяτρиφугяροваяπем πρя 15 усκορеяии силы τяжесτи, ρавяοй 10000 β , в τечеяие 10 мия. Οсадοκ προмываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφиρа для удалеяяя лиπидныχ πρямесей. Пροдуκτ из οсадκа эκсτρа- гиρуюτ 5 мл меτаяοла. Ι χοд προдуκτа 0, 11 г (95 ). Пρямеρ 9 20 10 г οτρу бей зеρяа πшеяяцы гοмοгеяизяρуюτ в вοд- яοм ρасτвορе χлορясτοгο яаτρяя κοнцеяτρацией 0, 05 Μ πρи ρΗ, ρавяοм 7, в гοмοгеяязаτορе. Пοлучеяяый гοмο- геяаτ цеяτρяφугяρуюτ πρи усκορеяии сялы τяжесτя, ρав- нοй 10000 § , в τечеяяе 10 мия. Οτделеяяую бесκлеτο- 25 чяую вοднο-сοлевую φазу ποдвеρгаюτ φильτρацяя на улъ- τρаφяльτρе с ρазмеροм πορ 0,2 мκм. Οсадοκ сяямаюτ с φяльτρа я πρсмываюτ 50 мл диэτилοвοгο эφяρа для уда- ленπя ляπядныχ πρимесей. Пροдуκτ из οсадκа эκсτρаги- ρуюτ 2 мл меτаяοла. Βыχοд προдуκτа 0, 06 г (63$). 30 Ηροмышленяая πρимеяπмοсτь
    [0078] Ηасτοящее изοбρеτеяие мοжеτ быτь ρеализοванο в χимπчесκοй προмышлеяяοсτи, в биοτеχяοлοгии и в меди- цияе.
    权利要求:
    Claims - 12 - ΦΟΡΜУЛΑ И30БΡΕΤΕΗИЯ
    1. Сποсοб ποлучеяия φοсφаτядиляяοзиτа из биοлο- гичесκοгο οбьеκτа πуτем гοмοгеяизации яазваннοгο οбь-
    5 еκτа и эκсτρаκцяя προдуκτа, ο τли ча ю щя й с я τем, чτο вκлючаеτ:
    - гοмοгеяязацию биοлοгячесκοгο οбьеκτа в вοднο- сοлевοм ρасτвορе с мοляρяοй κοяцеяτρацией в πρеделаχ οτ 0,005 дο I Μ πρи ρΗ οτ 5,0 дο 11,0;
    10 - ρазделеяие гοмοгеяаτа яа бесκлеτοчяую вοднο- сοлевую φазу, сοдеρжащую часτицы белοκ-φοсφаτядиляяο- зπτяοгο κοмπлеκса, и οсадοκ, сοдержащий яеρазρушеяяые κлеτκя я часτицы дρугиχ φοсφοлиππдοв, πуτем цеяτρиφу- гиροваяия πρи усκορения сялы τяжесτи οτ 3000 дο
    15 30000 § или φильτρацией яа φильτρе с ρазмеροм πορ 3-50 мκм;
    - выделеяие из бесκлеτοчяοй вοднο-сοлевοй φазы часτиц белοκн$οсφаτидилияοзяτяοгο κοмπлеκса;
    - эκсτρаκцню φοсφаτядиляяοзиτа из выделеяныχ ча- 20 сτπц белοκ-φοсφаτидилияοзйτяοгο κοмπлеκса.
    2. Сποсοб ποπ.Ι, ο τ ли чаю щя й с я τем, чτο гοмοгеяязацию биοлοгичесκοгο οбьеκτа προвοдяτ в вοдяο-сοлевοм. ρасτвορе с мοляρяοи κοяценτρацией οτ 0,05 дο 0,1 Μ.
    25 3. Сποсοб πο π. I, ο τ.л я чаю щи й с я τем, чτο выделение часτяц белοκ-φοсφаτядилинοзπτяοгο κοмπ- леκса из бесκлеτοчяοй вοднο-сοлевοй φазы προвοдяτ . гель-χροмаτοгρаφией яа сορбеяτе, ποзвοляющем ρазде- ляτь вещесτва с мοлеκуляρяοй массοй бοлее I миллиοяа
    30 Дальτοя.
    4. Сποсοб ποπ. I, ο τ.ля чаю щи й с я τем, чτο выделеяие часτиц белοκ-φοсφаτядилπяοзиτяοгο κοмπ- леκса из бесκлеτοчнοй вοдяο-сοлевοй φазы προвοдяτ ульτρаφильτρацией яа φильτρе с ρазмеροм πορ яе бοлее
    35 0,2 мκм.
    5. Οιοеοб ποπ. I, ο τ л и ча ю щπ й с я τем,. чτο выделеяие часτяц белοκ-φοсφаτядилинοзяτяοгο κοмπ- леκса яз бесκлеτοчнοй. вοдяο-сοлевοй φазы προвοдяτ ще- - 13 - лοчными или нейτρальными προτеазами.
    6. Сποсοб πο π.Ι, ο τли ч а ющ и й с я τем, чτο эκсτρаκцию φοсφаτидижнοзиτа из вцделенныχ часτиц
    5 белοκ-φοсφаτидилинοзиτнοгο κοмπлеκса προвοдяτ меτанο- лοм.или смесью егο с χлοροφορмοм, иж дисτилжροваннοй вοдοй.
    7. Сποсοб πο ππ.Ι-5, ο τли ча ющий с я τем, чτο в κачесτве ρасτиτельнοгο οбъеκτа исποльзуюτ
    Ю προдуκτы πеρеρабοτκи семяя злаκοвыχ ρасτений.
    类似技术:
    公开号 | 公开日 | 专利标题
    AU2017216531B2|2019-04-11|Extraction of lipid from cells and products therefrom
    US9907321B2|2018-03-06|Separating crustacean polar phospholipid compositions without emulsification
    De Groot et al.1976|Effects of alkali-treated proteins: feeding studies with free and protein-bound lysinoalanine in rats and other animals
    EP0776356B1|1999-06-30|Verfahren zur gewinnung von nicht wasserlöslichen, nativen produkten aus nativen stoffgemengen mit hilfe der zentrifugalkraft
    ES2277490B1|2008-05-16|Procedimiento para la industrializacion de subproductos de almazara y producto obtenido.
    US3711392A|1973-01-16|Method for the utilization of organic waste material
    US8568819B2|2013-10-29|Solid composition containing lipids from crustaceans
    CN101413018B|2011-04-27|一种基因组dna的提取方法
    RU2039469C1|1995-07-20|Способ получения яичного желтка с пониженным содержанием холестерина
    EP0035264B1|1983-03-09|Verfahren und Anlage zur Behandlung flüssiger landwirtschaftlicher Abfälle
    CN102051381B|2012-10-03|一种利用啤酒酵母生产酵母抽提物的方法
    US9464309B2|2016-10-11|Methods for recovering peptides/amino acids and oil/fat from one or more protein-containing raw materials, and products produced by the methods
    WO2010039030A1|2010-04-08|Microalgae extract containing ω3 -polyunsaturated fatty acids and method for extracting oil from micro-organisms
    CN106459828A|2017-02-22|分步加工有机油的方法和装置
    US4293334A|1981-10-06|Recovery of metals
    Birch et al.1936|A study of the chemical nature of vitamin B6 and methods for its preparation in a concentrated state
    Schechter et al.1947|Colorimetric determination of DDT in milk and fatty materials
    CN102688613A|2012-09-26|造纸法烟草薄片生产过程中萃取液的深度净化除杂工艺
    CN105267260A|2016-01-27|类囊体的大规模制备方法
    CN1821238B|2012-06-06|改善未加工食油和脂肪质量和回收次要成份的方法
    WO2006095964A1|2006-09-14|Method for abstract of liquid extract from chlorella
    US4154675A|1979-05-15|Ion exchange processes using cellulosic materials
    CN101744326A|2010-06-23|枸杞清汁及其制备方法
    RU2604190C2|2016-12-10|Способ получения малозольного порошка белка птичьей плазмы с использованием птичьей крови
    ES2324141B1|2010-05-25|Procedimiento para el tratamiento de aguas procedentes del lavado de productos agricolas.
    同族专利:
    公开号 | 公开日
    HUT47219A|1989-02-28|
    EP0288569A4|1990-01-08|
    EP0288569A1|1988-11-02|
    HU199691B|1990-03-28|
    US4977091A|1990-12-11|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    法律状态:
    1988-05-19| AK| Designated states|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): HU JP US |
    1988-05-19| AL| Designated countries for regional patents|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): AT BE CH DE FR GB IT NL SE |
    1988-07-07| WWE| Wipo information: entry into national phase|Ref document number: 1987905561 Country of ref document: EP |
    1988-11-02| WWP| Wipo information: published in national office|Ref document number: 1987905561 Country of ref document: EP |
    1991-11-28| WWW| Wipo information: withdrawn in national office|Ref document number: 1987905561 Country of ref document: EP |
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    SU4142793/28||1986-11-12||
    SU4142793||1986-11-12||JP50498087A| JPH01503299A|1987-05-21|1987-05-21||
    [返回顶部]